mitophagy_mitophagy翻译

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       好久不见了，今天我想和大家探讨一下关于“mitophagy”的话题。如果你对这个领域还不太了解，那么这篇文章就是为你准备的，让我们一起来学习一下吧。

1.细胞自噬的自噬形式

细胞自噬的自噬形式

       细胞自噬主要有三种形式：微自噬（microautophagy)、巨自噬（macroautophagy）和分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy，CMA）。 定义：指溶酶体或者液泡内膜直接内陷底物包裹并降解的过程。

       作用时间：多在种子成熟时储藏蛋白的沉积或萌发时储存蛋白的降解中起作用。 定义：在其过程中，底物蛋白被一种双层膜的结构（粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜）包裹后形成直径约400~900纳米大小的自噬小泡（autophagosome)，接着自噬小泡的外膜与溶酶体膜或者液泡膜融合，释放包裹底物蛋白的泡状结构到溶酶体或者液泡中，并最终在一系列水解酶的作用下将其降解，我们将这种进入溶酶体或者液泡腔中的泡状结构称为自噬小体。

       作用时间：营养缺乏条件下培养的细胞、植物的免疫反应、叶片衰老及环境胁迫应答。 (1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模拟内质网应激

       (2) Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chloride（氯化锂）：IMPase 抑制剂（即Inositol monophosphatase，肌醇单磷酸酶）

       (3) Earle's平衡盐溶液：制造饥饿

       (4) N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：Class I PI3K Pathway抑制剂

       (5) Rapamycin：mTOR抑制剂

       (6) Xestospongin B/C：IP3R阻滞剂 (1) 3-Methyladenine（3-MA）：（Class III PI3K） hVps34 抑制剂

       (2) Bafilomycin A1：质子泵抑制剂

       (3) Hydroxychloroquine（羟氯喹）：Lysosomal lumen alkalizer（溶酶体腔碱化剂）

       除了选用上述工具药外，一般还需结合遗传学技术对自噬相关基因进行干预：包括反义RNA干扰技术（Knockdown）、突变株筛选、外源基因导入等。 细胞经诱导或抑制后，需对自噬过程进行观察和检测，常用的策略和技术有：

       1、观察自噬体的形成

       由于自噬体属于亚细胞结构，普通光镜下看不到，因此，直接观察自噬体需在透射电镜下。Phagophore的特征为：新月状或杯状，双层或多层膜，有包绕胞浆成分的趋势。自噬体（AV1）的特征为：双层或多层膜的液泡状结构，内含胞浆成分，如线粒体、内质网、核糖体等。自噬溶酶体（AV2）的特征为：单层膜，胞浆成分已降解。（autophagic vacuole，AV）

       2、在荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬形成

       由于电镜耗时长，不利于监测（Monitoring）自噬形成，人们利用LC3在自噬形成过程中发生聚集的现象开发出了此技术。无自噬时，GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中；自噬形成时，GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。

       3、利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成

       自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），因此，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。

       （注意：LC3抗体对LC3-II有更高的亲和力，会造成假阳性。方法2和3需结合使用，同时需考虑溶酶体活性的影响。）

       4、检测长寿蛋白的批量降解：非特异

       5、MDC（Monodansylcadaverine，单丹磺酰尸胺）染色：包括自噬体，所有酸性液泡都被染色，故属于非特异性的。

       6、CellTrackerTM Green染色：主要用于双染色，但其能染所有的液泡，故也属于非特异性的。 在研究自噬相关蛋白时，需对其进行定位。由于自噬体与溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体关系密切，为了区别，常用到一些示踪蛋白在荧光显微镜下来共定位：

       Lamp-2：溶酶体膜蛋白，可用于监测自噬体与溶酶体融合。

       LysoTrackerTM 探针：有红或蓝色可选，显示所有酸性液泡。

       pDsRed2-mito：载体，转染后表达一个融合蛋白（红色荧光蛋白+线粒体基质定位信号），可用来检测线粒体被自噬掉的程度（Mitophagy）。

       MitoTraker探针：特异性显示活的线粒体，荧光在经过固定后还能保留。

       Hsp60：定位与线粒体基质，细胞死亡时不会被释放。

       Calreticulin（钙网织蛋白）：内质网腔

       抗衰老食物一、紫色类食物

       比如：紫甘薯、紫土豆、紫玉米、紫扁豆

       紫色食物富含一种天然色素--花青素。花青素属于类黄酮物质，有很好的抗氧化能力，能有效清除体内有害物质自由基，帮助人体抗氧化，对抗衰老，堪比维生素C和维生素E。

       抗衰老食物二、蔬果类

       比如：葡萄、石榴、胡萝卜、核桃

       新鲜果蔬中含丰富的胡萝卜素、维生素C和维生素E。胡萝卜素是抗衰老的最佳元素，能保持人体组织或器官外层组织的健康。而维生素C和维生素E则可延缓细胞因氧化所产生的老化，让青春容颜常驻。此外，这些富含膳食纤维的新鲜果蔬还能促进肠道的健康，帮助排出体内毒素，进而也起到延缓衰老的作用。

       抗衰老食物三、奶类

       比如：牛奶、酸奶、豆奶

       酸奶、牛奶还有豆奶都是我们常喝的奶类饮品，牛奶和酸奶中含有优质蛋白质，并含有脑所必需的几乎所有氨基酸。同时牛奶中的钙非常易于被吸收，是脑代谢不可缺少的重要物质。

       而大豆含有丰富的蛋白质、脂肪、磷脂、胡萝卜素、多种维生素、氨基酸和矿物质等众多营养成分，并能有效阻止人体钙质的流失，经常食用有助于健康还可平衡体内营养结构，减少或避免肥胖病、营养不良等现代儿童常见病的发生，并可调节血脂、保护肝脏、防止血管硬化和促进思维能力，大豆中所含的微量成分异黄酮对人体还具有防癌、防止骨质疏松等保健作用。而且豆奶的营养吸收率最高，可以吸收豆类98%的营养物质。

       今天关于“mitophagy”的讲解就到这里了。希望大家能够更深入地了解这个主题，并从我的回答中找到需要的信息。如果您有任何问题或需要进一步的信息，请随时告诉我。